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宝运莱官方网站生物|细胞复苏

更新时间:2024-03-21 点击量:93

细胞复苏的原则


快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。


一. 实验前准备:


1.将水浴锅预热至37℃


2.用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。


3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等。


二.取出冻存管:


1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。


2.从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。


三.迅速解冻:


1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。


2.约1-2min后冻存管内液体溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。


四.平衡离心:


用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心3min 


五.制备细胞悬液:


1.吸弃上清液。


2.向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。


六.细胞计数:


细胞浓度以5×105/ml为准。


七.培养细胞:


将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养,换液时间由细胞情况而定。


特别注意初学者常犯的错误:


1水浴锅未预热或者未预热到37℃。


2.水浴锅内冻存管太多,导致传热不佳,使融化时间延长。


3.离心前忘记平衡,导致离心机损坏和细胞丢失。


4.一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。