戊二醛二步法实验原理及步骤

产品名称：戊二醛 

规格：BR，25-28%

包装：100ML/500ML/4LT/20L

CAS： 111-30-8

分子式：C5H8O2

分子量：F.W. 100.12

保存条件：  RT

作用：科研

戊二醛二步法
1. 原理
戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。
2. 标记步骤
（1）称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室温静置夜。
（2）反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。
（3）将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。
（4）用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml，继续搅拌3小时。
（5）加0.2M赖氨酸0.25ml，混匀后，置室温2小时。
（6）在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃ 1小时。
（7）3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
（8）将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后（用萘氏试剂检测），10,000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。
 

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